Specifinių IgE antikūnų nustatymas

.

Dabar naudojama daugybė kitų imunologinių metodų, nustatančių IgE, pavyzdžiui, Pharmacia CAP sistema, MAST‘o sistema, RAPID metodas.
       UniCAP 100 prietaisu (Pharmacia & Upjohn Diagnostics AB, Upsala, Švedija) tyrimas atliekamas per 2,5 val. Tai greita, visiškai integruota ir automatizuota fluorimunofermentinės analizės in vitro sistema (CAP). Reakcija vyksta mažose „kepurėlėse“ (ImmunoCAP), prie kurių kovalentiškai prijungiami pelės monokloniniai antikūnai prieš žmogaus bendrąjį IgE (arba sIgE ar ECP). Sudėjus pavyzdžius, standartinius ir kontrolinius tirpalus, inkubuojama. Inkubacijos metu vyksta antigeno ir antikūno reakcija. Atlikus plovimo procedūrą, sulašinami fermentu (β-galaktozidaze) žymėti pelės monokloniniai anti-IgE (arba anti-sIgE ar anti-ECP) antikūnai. Po inkubacijos ir plovimo „išryškinama“: inkubuojama su „išryškinamuoju“ tirpalu (development solution) – 0,01% 4-metilbelliferil-β-D-galaktozidaze ir 0,05% ketonu CG. Sustabdžius reakciją 4% natrio karbonatu, matuojama tirpalo fluorescencija. Ji tiesiog proporcinga serumo pavyzdžių IgE (arba sIgE ar ECP) koncentracijai. IgE matavimo ribos, naudojant UniCAP sistemą, yra 2-5000 kU/l; sIgE – 0,35-100 kU/l; ECP – 2-200 μg/l.
        Tai – dvipakopė imuninė reakcija.
        I pakopa.:
        1) antigenas jungiamas su kietąja faze (imunosorbentu);
        2) kietoji fazė inkubuojama su ligonio serumu;
        3) IgE molekulės, specifiškos antigenui, jungiasi prie kietosios fazės;
        4) nesusijungę IgE išplaunami (pašalinami išplaunant).
        II pakopa:
     5) ir 6) į serumą pridedama pažymėto anti-IgE;
     7) jis konkuruoja su sujungtu IgE;
     8) po to, kai nesujungtas anti-IgE nuplaunamas, matuojamas kietosios fazės radioaktyvumas ar fluorescencija ir jis naudojamas matuoti IgE koncentracijai ligonio serume.